開封外泌體提取試劑單價
外泌體(exosome)是所有細胞釋放出的細菌大小的顆粒,。它們天然地存在于血液中,。根據(jù)來自美國德州大學MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,,對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法,。論文通信作者為德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學系研究員RaghuKalluri博士,。在這項新的研究中,,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,,從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解,,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活,。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中。一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,。開封外泌體提取試劑單價
Exosome,,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物,。然而較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,能很好的保護其包被的物質(zhì),且能靶向特定細胞或組織,,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeteddeliverysystem),。開封正規(guī)外泌體提取試劑單價外泌體提取:低速離心去除細胞和凋亡碎片,。
外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,,可通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,,內(nèi)涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA,、蛋白質(zhì)、microRNA,、DN段等多種物質(zhì),,存在于血液、唾液,、尿液,、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞,。如今,,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展,、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導過程中都發(fā)揮著重要作用,。
外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法,;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,,較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力,,從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結(jié)果顯示,,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者,。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,,超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程,,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,,和超高速離心相比,,超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體。但是,,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。用于外泌體提取的體液收集注意事項:注意抗凝劑的選擇,。
外泌體的形成與鑒定:首先,,細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu),,包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白,導致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome,,ESE)的從頭形成,,或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合;trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs,。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,LSEs),,較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體),。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,這一過程導致MVBs含有多個ILVs,。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,,較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白,、細胞內(nèi)蛋白,、RNA、DNA,、氨基酸和代謝物,。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,。外泌體提取:通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,,這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu),。珠海外泌體提取試劑服務電話
通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì),。開封外泌體提取試劑單價
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,,因此,,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,,特別是這個密度范圍又比較寬,。開封外泌體提取試劑單價
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