江蘇細(xì)胞凍存液保質(zhì)期
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍速融,,這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力,。凍存細(xì)胞不加任何保護劑,會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,,從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,,引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,,PH,電解質(zhì)等的改變,,進而促使細(xì)胞死亡,。細(xì)胞凍存液主要成分是什么?江蘇細(xì)胞凍存液保質(zhì)期
細(xì)胞類型:源于人多能干細(xì)胞的神經(jīng)祖細(xì)胞(NPCs)用于凍存在神經(jīng)誘導(dǎo)后的任何時間通過STEMdiffTM神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)生成的NPCs解凍復(fù)蘇的NPCs具有可重復(fù)性的高回收率,表型正常,,且保持了可擴增及分化為神經(jīng)元,、星形膠質(zhì)細(xì)胞和其它神經(jīng)細(xì)胞類型的潛能產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號mFreSRTM10x5mL小管包裝0585450mL05855FreSRTM-S50mL05859STEMdiffTM神經(jīng)祖細(xì)胞凍存液100mL05838MesenCultTM-ACF凍存液50mL05490用于凍存在神經(jīng)誘導(dǎo)后的任何時間通過STEMdiffTM神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)生成的NPCs低溫細(xì)胞凍存液哪個品牌好通用型細(xì)胞凍存液配方是多少?
用以下方法凍存細(xì)胞:4℃放置15-30分鐘(一定不能省略該步驟,,否則凍存液無法完全滲透過細(xì)胞膜進入細(xì)胞起保護作用)①緩速降溫方法(以使用需異丙醇的Nalgene程序降溫盒為例,,冷凍細(xì)胞的過程中可以輔助實現(xiàn)緩慢降溫,以達到近似于1℃/分鐘):-80℃過夜→液氮長期保存,。(不推薦在-80℃長期保存,;異丙醇易揮發(fā),并且容易吸收空氣中的水分,,建議使用5次后更換)②逐步降溫法:-20℃保存2小時,,然后-80℃中保存2小時,隨后可以在-196℃液氮中長期保存,。
凍存的溫度將細(xì)胞存儲在一個非常低的溫度下,,按理論上推斷是能讓細(xì)胞獲得極長(接近無限)的壽命,然而實際上細(xì)胞這樣的凍存有效壽命很難去證實,,研究者們利用干制的種子進行相關(guān)的實驗發(fā)現(xiàn)當(dāng)樣品被放置在不同的溫度下的時候(甚至是溫的時候),,這些樣品會發(fā)生明顯的變化性的惡化。當(dāng)溫度低于多元醇水溶液的玻璃轉(zhuǎn)化點(Tg)的時候,,大約在-136°C左右,,這被認(rèn)為是能夠降低生物活性的溫度范圍;而當(dāng)溫度達到了-196°C(液氮的沸點無血清快速細(xì)胞凍存液,,減少各類霉菌和支原體等的污染,,確保凍存細(xì)胞安全.
一、細(xì)胞冷凍保存1.材料:生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞,、新鮮培養(yǎng)基,、DMSO(SigmaD-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020),、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061),、血球計數(shù)盤與蓋玻片,、等速降溫機(KRYO10SeriesII)2,、冷凍保存方法:(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--20℃30分鐘--80℃16~18小時(或隔夜)-液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時,,以防止胞內(nèi)冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化.上海快速細(xì)胞凍存液廠家
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。江蘇細(xì)胞凍存液保質(zhì)期
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷,。理論上儲存時間是無限的,。江蘇細(xì)胞凍存液保質(zhì)期
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